MANUAL DE LA UNIÓN EUROPEA DE MÉTODOS PARA LA DETECCIÓN DE LEGIONELLA SPP

La legionelosis es una infección bacteriana aguda causada por bacterias del género Legionella, más frecuentemente Legionella pneumophila. La legionella puede causar neumonía grave conocida entonces como enfermedad del legionario (LD), una enfermedad febril leve no neumónica llamada fiebre de Pontiac y legionelosis extrapulmonar. 

 

La LD es una causa importante de neumonía adquirida por la comunidad y nosocomial, cuyos factores de riesgo son la edad avanzada, el tabaquismo y las comorbilidades subyacentes, como el cáncer, la enfermedad pulmonar crónica, la diabetes, la enfermedad renal y los estados de inmunosupresión.

 

La enfermedad con frecuencia requiere hospitalización y tiene una tasa de mortalidad de aproximadamente el 10-15%. La mortalidad es mayor entre los individuos inmunocomprometidos, con una tasa de mortalidad reportada de hasta el 39% en pacientes hospitalizados. La mayoría de los casos de LD son esporádicos, con un marcado patrón estacional que ocurre predominantemente durante el verano y el otoño; sin embargo, los brotes también se declaran con frecuencia. 

 

Cuando se identifica un caso de LD, se realizan investigaciones para determinar el historial de exposición del paciente durante el período de incubación, generalmente definido como dos semanas antes del inicio de los síntomas. Tales investigaciones generalmente implican muestreo de agua y biopelículas de sistemas de agua, torres de enfriamiento u otras posibles fuentes ambientales.

Este manual de laboratorio tiene como objetivo presentar métodos, protocolos y buenas prácticas de laboratorio para apoyar el diagnóstico y la detección oportunos y precisos de Legionella en muestras clínicas y ambientales, así como la identificación y confirmación de fuentes de infección. 

 

Mediante la promoción de prácticas de laboratorio armonizadas y el fortalecimiento de la capacidad del laboratorio, también tiene como objetivo apoyar la vigilancia, facilitar la detección e investigación de brotes y mejorar la preparación y las respuestas coordinadas a posibles amenazas transfronterizas para la salud.

 

Dos métodos son fundamentales para el diagnóstico temprano de la LD: la detección del antígeno urinario de Legionella pneumophila serogrupo 1 (UAT) y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) realizadas en muestras respiratorias que detecta el ADN de Legionella directamente en muestras.

 

La serología tiene un papel limitado en el diagnóstico de LD para el manejo clínico inmediato. Su aplicación principal es la detección de respuestas específicas de anticuerpos contra los serogrupos y especies de Legionella, que pueden apoyar la identificación de la cepa infecciosa.

 

El cultivo debe realizarse para pacientes con un UAT positivo confirmado, un resultado positivo de PCR de Legionella o a petición por sospecha. El cultivo sigue siendo esencial para las investigaciones epidemiológicas, la caracterización de cepas y los estudios de susceptibilidad a los antimicrobianos.

 

Para el muestreo, nos valemos de las normas y reglamentarias pertinentes incluyen: 

 

●  UNI EN ISO19458:2006 Calidad del agua - Muestreo para análisis microbiológico ● Directiva 2000/54/CE del Parlamento Europeo y del Consejo relativa a la protección de los trabajadores frente a los riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos en el trabajo. 

● Procedimiento de muestreo de Legionella y posibles sitios de muestreo

 

Para el cultivo, el aislamiento y enumeración de Legionella spp. se realiza en muestras de agua como matrices potables, industriales, de aguas residuales, naturales y otras relacionadas con el agua, como biopelículas o sedimentos. Estas recomendaciones se basan en la norma ISO 11731:2017 "Calidad del agua - Enumeración de Legionella".

 

Se revisa el método Legiolert que es una alternativa basada en cultivos, Legiolert®/Quanti-Tray® y que ha sido validado por AFNOR para la enumeración de Legionella pneumophila en muestras de agua ambiental. El método detecta L. pneumophila independientemente del serogrupo utilizando un medio de cultivo líquido.

 

La PCR en muestras ambientales está regulada por la ISO/TS 12869:2019 Calidad del agua - Detección y cuantificación de Legionella spp. y/o L. pneumophila por concentración y amplificación génica por reacción cuantitativa en cadena de la polimerasa (qPCR). Este método permite la detección y cuantificación del ADN de Legionella en un volumen definido de agua utilizando PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR). El uso de qPCR es particularmente valioso durante los clusters y las investigaciones de brotes, donde se debe analizar un gran número de muestras de agua en un corto período de tiempo. Debido a su rapidez, sensibilidad y potencial de estandarización, también se recomienda el uso de qPCR para el control rutinario del sistema de agua. El método detecta ADN tanto de bacterias viables como no viables y, por lo tanto, no evalúa directamente la cultivabilidad bacteriana.

 

Tras la convocatoria de propuestas publicada por la Comisión Europea en 2023 para la designación de los primeros Laboratorios de Referencia de la UE para la Salud Pública (EURL), el Laboratorio de Referencia de la UE en Salud Pública de Legionella (EURL-PH-LEGI) fue designado oficialmente en diciembre de 2024 para un período de siete años.

 

El objetivo principal del EURL-PH-LEGI es promover las mejores prácticas y apoyar a los Estados miembros de la Unión Europea en los campos de métodos de diagnóstico, análisis y tipificación de Legionella. Esto tiene como objetivo garantizar datos fiables y comparables, fortalecer las capacidades del laboratorio y mejorar la vigilancia y notificación de los casos.

 

Los objetivos del EURL-PH-LEGI son:

 

·      La estandarización y armonización de los métodos para la detección y caracterización de Legionella

 

·      La evaluación y mejora de la calidad de los métodos de vigilancia basados en laboratorio

 

·      La prestación de asesoramiento científico y asistencia técnica tanto al ECDC como a la red de laboratorios

 

·      El establecimiento de un programa de entrenamiento destinado a adquirir y fortalecer los métodos de laboratorio y vigilancia para Legionella

 

Según el Reglamento de ejecución (UE) 2024/892 de la Comisión de 22 de marzo de 2024 por el que se designan laboratorios de referencia de la Unión Europea para determinados ámbitos específicos de salud pública, se establece que el consorcio del EURL-PH-LEGI consta de 4 Laboratorios Nacionales de Referencia para Legionella (NRL-L) Cada uno de los laboratorios cubre tareas basadas en su experiencia complementaria en el campo de la Legionella desarrollada durante varios años y son:

 

 

Todos los investigadores principales dentro del consorcio tienen responsabilidades a nivel europeo relacionadas con la legionella, como miembros del Comité de Coordinación de ELDSNet o del Comité Ejecutivo del Grupo de Estudio ESCMID para la Infección por Legionella (ESGLI).

 

El Consorcio (EURL) prestará apoyo a los laboratorios nacionales de referencia y promoverá las buenas prácticas y la calidad para reforzar la microbiología de salud pública en el ámbito de la legionela y a los miembros de las redes de laboratorios de la Red Europea de Vigilancia de la Enfermedad del Legionario (ELDSNet) (1) del Centro Europeo para la Prevención y el Control de las Enfermedades (ECDC) sobre aspectos relacionados con las pruebas diagnósticas, los métodos de ensayo y la utilización de determinadas pruebas para la vigilancia, la notificación y la información uniformes de enfermedades.

 

Para la ejecución de las actividades del plan de trabajo del EURL, que este debe desarrollar y acordar con el ECDC, el EURL coordinará la red de laboratorios de la ELDSNet, integrada por los Puntos Focales Nacionales (NFP) para la enfermedad del legionario y los Puntos de Contacto Operativos (OCP) para la microbiología de la enfermedad del legionario. El EURL participará en las redes y estructuras pertinentes del ECDC, a petición de este.

 

El EURL garantizará:

 

— suficiente personal cualificado para el volumen de tareas que debe llevar a cabo en su ámbito de designación;

— la formación adecuada del personal para la ejecución de las tareas que debe llevar a cabo.

 

El EURL establecerá su política de confidencialidad, que incluye normas para la manipulación, el almacenamiento y el tratamiento adecuados y seguros de las muestras y la información y medidas para evitar la divulgación indebida de información confidencial.

 

El EURL será responsable de las siguientes tareas:

 

a) proporcionar métodos de referencia, por ejemplo, con fines de detección y caracterización en el ámbito del EURL a los miembros de la red apoyada por este, en función de las necesidades definidas por dicha red;

 

b) proporcionar servicios de diagnóstico de referencia en el ámbito del EURL a los miembros de la red apoyada por este;

 

c) proporcionar sistemas de evaluación externa de la calidad para la detección, el aislamiento y la caracterización de especímenes clínicos y ambientales en el ámbito del EURL a los miembros de la red apoyada por este, en función de las necesidades definidas por dicha red;

 

d) prestar asesoramiento científico y asistencia técnica, incluso sobre técnicas de diagnóstico y métodos de caracterización en el ámbito del EURL a los miembros de la red apoyada por este, en función de las necesidades definidas por dicha red;

 

e) proporcionar asesoramiento científico y apoyo técnico al ECDC sobre temas de laboratorio, incluidos el desarrollo de métodos, la tipificación genómica, la disponibilidad de materiales y otros temas en el ámbito del EURL;

 

f) prestar asistencia científica y técnica a la Comisión en relación con el ámbito específico de salud pública del EURL, en coordinación con el ECDC;

g) realizar visitas a países para examinar, evaluar y mejorar la vigilancia de laboratorio para la detección de casos y brotes en el ámbito del EURL;

 

h) facilitar información, orientación y apoyo al ECDC en situaciones de brotes en el ámbito del EURL, incluidas contribuciones a las evaluaciones del riesgo realizadas por el ECDC;

 

i) organizar e impartir formación, como formaciones «wet-lab», en el ámbito del EURL a los miembros de la red apoyada por este;

 

j) organizar y realizar seminarios web científicos en el ámbito del EURL para los miembros de la red apoyada por este;

 

k) garantizar la coordinación, la comunicación y la difusión con los miembros de la red apoyada por el EURL y con el ECDC;

 

l) organizar reuniones de la red de laboratorios en el ámbito del EURL;

 

ll) garantizar la coordinación con otros laboratorios de referencia de la UE en el ámbito de la salud pública o en otros ámbitos, como los productos sanitarios para diagnóstico in vitro, los centros colaboradores de la Organización Mundial de la Salud (OMS) o las iniciativas pertinentes en el ámbito del EURL;

 

m) colaborar, en cooperación con el ECDC, con laboratorios de terceros países y con la Agencia Europea de Medio Ambiente (AEMA) y la Agencia Europea de Medicamentos (EMA), según proceda;

 

n) prestar asistencia científica y técnica sobre otras cuestiones de interés para los miembros de la red apoyada por el EURL